摘要 為了解豬弓形蟲的感染情況,隨機采集新鄉市某屠宰場的待宰豬血液50份,通過弓形蟲間接血凝試驗檢測其抗體水平。結果表明,弓形蟲抗體效價在1∶64以上的有7頭,陽性率為14%,可為弓形蟲病的防治提供理論依據。

關鍵詞 待宰豬;弓形蟲;正向間接血凝試驗;血清學調查

中圖分類號 S858.28;R531.8 文獻標識碼A文章編號 1007-5739(2010)18-0294-01

弓形蟲病是由剛地弓形蟲寄生在人、畜、禽的肺、淋巴結、肝、脾、腦及其他組織細胞內引起的一種急性、熱性原蟲病,是一種人和多種動物共患的寄生蟲病[1]。人或動物通過攝入被剛地弓形蟲卵囊污染的食物或水源,或通過攝食含包囊的肉而被感染。在美國,豬肉是被認為引起人感染弓形蟲病的主要傳染源[2]。弓形蟲病對人類健康危害極大,可造成孕婦流產、死胎、畸形兒、弱智兒等一系列圍產期疾患,同時它也是神經系統和眼科疾患的主要病原之一[1]。因此該病給人類健康和畜牧業發展帶來極大危害和威脅。為了解新鄉市待宰豬弓形蟲的感染情況,通過弓形蟲正向間接血凝試驗(IHA),進行弓形蟲感染的血清學調查。

1材料和方法

1.1試驗材料

樣品來自新鄉市某屠宰場的待檢豬,隨機采集血液50份;弓形蟲間接血凝抗原、陰性血清、陽性血清及稀釋液,購自中國農科院蘭州獸醫研究所。試驗器材:微量移液器,96孔“V”型微量反應板,微型振蕩機,生化培養箱,電熱恒溫水浴鍋。

1.2試驗方法

1.2.1診斷抗原的預處理。按凍干抗原瓶簽所標毫升數用滅菌蒸餾水稀釋搖勻,放入滅菌離心管中,1 500~2 000 r/min離心10 min,棄去上清液,加等量稀釋液搖勻,之后置于4 ℃冰箱中放置24 h,作為診斷液使用。稀釋后的診斷液要在10 d內用完,否則棄用。

1.2.2血清分離。將血樣置于37 ℃生化培養箱中1 h,之后置4 ℃冰箱,自然析出血清,將血清抽出裝入小離心管中,于56 ℃水浴鍋中滅活30 min,4 ℃保存備用。

1.2.3加稀釋液。反應在96孔“V”型微量反應板上進行,每塊血凝板設待檢血清、陽性血清、陰性血清和稀釋液對照孔。用移液器加稀釋液于96孔“V”型微量反應板上,每孔75μL。稀釋液于陽性、陰性血清對照孔各加8孔,被檢血清孔各加4孔。

1.2.4稀釋。在第1孔加陽性血清、陰性血清和待檢血清各25 μL,混勻,稀釋,用移液器移取25 μL置于相應第2孔內,按此法依次往后稀釋,稀釋到第7孔或第3孔,最后棄去25 μL,每孔內的液體量為75 μL。每排的最后一孔為稀釋液對照孔。

1.2.5加診斷液。每孔加25 μL診斷液,加完后將反應板置于微型振蕩器上,振蕩1~2 min,直到診斷液中的血球分布均勻。取下反應板,蓋上一張與反應板大小相等的干凈紙,以防止灰塵落入。置于37 ℃下作用2~3 h,判定結果。

1.2.6結果判定。以50%紅細胞凝集(++)的最高稀釋倍數判定為該血清的凝集價(效價)。在陽性對照血清滴度不低于1:1024(第5孔“++”),陰性對照孔血清除第1孔允許存在前滯現象(+)外,其余各孔及稀釋液對照孔均為“-”的前提下,對待檢血清進行判定。血清抗體效價≥1∶64者判為陽性;效價≤1∶64者判為陰性。最后統計陽性率。

2結果與分析

由表1可以看出,在50份待宰豬被檢血清樣品中,弓形體抗體的陽性數為7份,陽性率為14%。此結果較1989年河南省人畜弓形蟲病調查協作組[3]對武涉縣調查的豬弓形蟲抗體陽性率(49.41%)、1992年杜重波等[4]對發生豬流產的甘肅省高臺縣種豬場調查的弓形蟲抗體陽性率(41.5%)和1996年畢運龍等[5]對云南省53個縣調查的豬弓形蟲抗體陽性率(26.4%)低;與1998年張德林等[6]對甘肅省天祝縣調查的豬弓形蟲抗體陽性率(13.8%)、2006年王天奇等[7]對洛陽地區部分規模化豬場調查的弓形蟲抗體總陽性率(16.5%)和育肥豬的陽性率(11.3%)接近。說明豬弓形蟲的感染率目前趨于平穩,豬群感染率與樣品采集的對象、時期、地區,以及飼養管理狀況和豬健康狀況等因素有關。

3結論與討論

3.1豬場感染弓形蟲的原因與對策

屠宰場的待宰豬來自新鄉市的養豬專業戶或散養戶,飼養方式為圈養,飼喂配合飼料,這種飼養方式在一定程度上限制了豬弓形蟲的感染和傳播。待宰豬的弓形蟲抗體陽性率為14%,說明新鄉市豬群依然存在弓形蟲的感染,可能與目前豬場老鼠成災、豬場養貓滅鼠和農村流浪貓增多等因素有關。建議相關部門設立流浪貓收容所,對流浪貓進行收容、去勢和領養等工作。豬場禁止養貓,加強飼料保管,嚴防被貓糞污染,同時做好滅鼠工作。新鄉市城郊有飼喂泔水的豬,主要銷往外地,所采樣品并沒有涉及。

3.2弓形蟲感染檢測方法的選擇

用弓形蟲正向間接血凝試驗檢測人或動物弓形蟲感染(下轉第296頁)

(上接第294頁)

的循環抗體,在感染后12 d左右即可檢出,并且循環抗體可在1~2年內維持較高水平[4],IHA法具有簡便、快捷、特異、對試驗條件要求不高等特點,適合弓形蟲感染的流行病學調查。2007年王艷華等[8]研制的弓形蟲抗體免疫膠體金快速檢測試紙條,其靈敏度明顯高于IHA法,適用于弓形蟲病的早期檢測和診斷,具有巨大的臨床應用前景。1992年杜重波等[4]研制的抗弓形蟲單克隆抗體反向間接血凝診斷試劑(MCAb-RIHA)和1989年傅翠娥等[9]建立的ELISA雙單克隆抗體夾心法可檢測血清弓形蟲循環抗原,具有診斷弓形蟲急性或活動性感染的價值,可以用于弓形蟲病早期診斷、流產病因學調查和流行病學調查。

3.3避免弓形蟲的職業感染

弓形蟲的滋養體會通過口、鼻、咽、呼吸道粘膜、眼結膜和皮膚侵入各種動物和人的體內[10]。弓形蟲病具有一定職業分布特點,動物飼養員、屠宰工人、肉類加工工人及弓形蟲病實驗室等人群易于感染[11]。獸醫、動物飼養員、屠宰工人、肉類出售和加工人員在工作時,應戴防護性手套和口罩,以免感染,并定期測定弓形蟲抗體水平。1%來蘇兒溶液1 min內能殺死滋養體[10],可用其對污染的環境和器械進行消毒。

4參考文獻

[1] 呂曉星.人畜共患病的防治(7)弓形蟲病[J].湖南農業,1996(8):22.

[2] STEUR B E,ALLATRE S D,MAGGIE,W L,et al.豬病學[M].8版.趙德明,張中秋,沈建忠,等譯.北京:中國農業大學出版社,2000:681-685.

[3] 河南省人畜弓形蟲病調查協作組.武涉縣人畜弓形蟲病的血清學調查[J].河南農業科學,1989(10):31-32.

[4] 杜重波,金兆慶,郭志剛,等.應用弓形蟲McAb-RIHA對甘肅省羊豬血清弓形蟲循環抗原的檢測[J].中國獸醫科技,1992,22(11):8-10.

[5] 畢運龍,張應國,胡金鳳,等.云南家畜弓形蟲感染的血清學調查[J].云南畜牧獸醫,1996(1):15-16.

[6] 張德林,李惠萍,杜重波,等.天祝縣人畜弓形蟲病流行病學調查[J].甘肅畜牧獸醫,1998,28(4):20-21.

[7] 王天奇,董發明,潘耀謙,等.洛陽地區豬弓形蟲病血清學調查與分析[J].湖北畜牧獸醫,2006(9):29-30.

[8] 王艷華,李克生,才學鵬,等.弓形蟲抗體免疫膠體金快速檢測試紙條的研制[J].中國獸醫科學,2007,37(1):29-32.

[9] 傅翠娥,陳彩華,蔣柏鳴,等.ELISA雙單克隆抗體夾心法檢測弓形蟲循環抗原的實驗研究[J].中國寄生蟲學與寄生蟲病雜志,1989,7(3):191-193.

[10] 北京農業大學.家畜寄生蟲學[M].北京:中國農業出版社,1981:430-435.

[11] 呂元聰.中國弓形蟲病流行病學研究近況[J].廣西醫學,2002,24(1):48-51.

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